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高保真聚合酶的特征概述

更新時(shí)間:2017-07-20      點(diǎn)擊次數(shù):1541
  高保真聚合酶的校正作用,與其它在PCR反應(yīng)中使用的聚合酶相比,Pfu聚合酶有著出色的熱穩(wěn)定性,以及*的“校正作用”。與TaqDNA聚合酶不同,PfuDNA聚合酶具有3'-5'外切酶的即時(shí)校正活性,可以即時(shí)的識(shí)別并切除錯(cuò)配核苷酸。因此,使用PfuDNA聚合酶進(jìn)行PCR反應(yīng),比使用Taq聚合酶有較低的錯(cuò)配突變幾率,保真性更高。
 
  高保真聚合酶共性,此酶zui早在大腸桿菌中發(fā)現(xiàn),以后陸續(xù)在其他原核生物及微生物中找到。這類酶的共同性質(zhì)是:[1]以脫氧核苷酸三磷酸(dNTP)為前體催化合成DNA;[2]需要模板和引物的存在;[3]不能起始合成新的DNA鏈;[4]催化dNTP加到生長(zhǎng)中的DNA鏈的3'-OH末端;[5]催化DNA合成的方向是5'→3'。下面首先介紹大腸桿菌的DNA聚合酶,然后簡(jiǎn)略說(shuō)明一下其他原核生物的DNA聚合酶和真核生物DNA聚合酶。
 
  高保真聚合酶功能,聚合作用,在引物RNA'-OH末端,以dNTP為底物,按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個(gè)將核苷酸加上去,就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的專一性主要表現(xiàn)為新進(jìn)入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對(duì)時(shí)才有催化作用。dNTP進(jìn)入結(jié)合位點(diǎn)后,可能使酶的構(gòu)象發(fā)生變化,促進(jìn)3'-OH與5'-PO4結(jié)合生成磷酸二酯鍵。若是錯(cuò)誤的核苷酸進(jìn)入結(jié)合位點(diǎn),則不能與模板配對(duì),無(wú)法改變酶的構(gòu)象而被3'-5'外切酶活性位點(diǎn)所識(shí)別并切除之。
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